7-硝基吲唑对氟致SH-SY5Y细胞凋亡及一氧化氮合成酶含量的影响

摘要：目的 探讨神经元型一氧化氮合成酶(nNOS)抑制剂7-硝基吲唑(7-nitroindazole,7-NI)对氟致体外培养细胞生长、凋亡保护作用的机制.方法 体外培养SH-SY5Y细胞,在培养液中加入不同浓度NaF(0、0.02、0.2、2.0、4.0 mmol/L),分别培养24、48、72h,同时在各组细胞培养液中联合应用7-NI(10-4、10-3、10-2 mmol/L);于倒置显微镜下观察细胞生长,以CCK-8试剂盒方法检测细胞存活率,以比色法和硝酸还原酶法测定细胞培养液中NO含量及NOS活力,以流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 与对照组比较,氟浓度为0.2 mmol/L(低氟组)和2.0 mmol/L(高氟组)时,24、48、72 h后细胞存活率分别下降至(83.76±1.04)％,(70.27±1.20)％,(54.40±0.98)％和(52.17±1.07)％,(40.60±1.11)％,(29.50±1.40)％.10-4mmol/L 7-NI可刺激细胞增殖,24h细胞存活率为(105.96±3.44)％;l0-3mmol/L 7-NI处理细胞24 h后的细胞存活率为(100±2.30)％;10-2mmol/L 7-NI可使细胞存活率下降,24h细胞存活率为(88.64±4.75)％.10-4、10-3、10-2 mmol/L 7-NI处理细胞24 h后细胞培养液中NO含量、NOS活力均降低,分别为(1.156±0.356)、(0.958±0.074)、(0.672±0.188)μmol/L和(0.403±0.089)、(0.398±0.010)、(0.103±0.076)U/ml.高剂量(10-2 mmol/L)7-NI组的SH-SY5Y细胞凋亡指数升高至(8.7±2.3)％,高于对照组(P＜0.05);低剂量(10-4、10-3 mmol/L)7-NI组的凋亡指数分别为(0.6±0.4)％和(1.0±0.2)％,与对照组差异无统计学意义(P＜0.05);低剂量7-NI组凋亡指数低于高剂量组,差异有统计学意义(P＜0.05).染氟24、48、72 h后细胞培养液中NO含量及NOS活力升高,低氟组的NO含量、NOS活力分别为(3.074±0.160)、(5.604±1.374)、(10.173±1.307)μmol/L和(0.743±0.122)、(0.959±0.054)、(1.446±0.12)U/ml,高氟组分别为(8.974±0.919)、(14.729±1.241)、(20.976±0.712)μmol/L和(1.086±0.024)、(1.728±0.130)、(2.583±0.192)U/ml,高于对照组[(1.320±0.280)、(2.420±0.658)、(2.867±0.662)μ.mol/L,(0.452±0.012)、(0.517±0.072)、(0.607±0.013)U/ml],差异有统计学意义(P＜0.05).与氟单独处理组相比,NaF联合应用7-NI后,各组NO含量及NOS活力均下降,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,氟可使SH-SY5Y细胞凋亡指数升高,差异有统计学意义(P＜0.01),并随着氟染毒剂量及时间的增加,细胞凋亡指数随之增加;联合应用7-NI后,各组细胞凋亡指数下降,差异有统计学意义(P＜0.01).氟可使SH-SY5Y细胞数量减少,形态变为圆形、不规则形,细胞存活率降低;低剂量(10-4、10-3 mmol/L) 7-NI组在相同视野下细胞数增加,高剂量(10-2 mmol/L)7-NI组细胞数明显减少,大部分细胞呈圆形或不规则形.结论 氟中毒所致细胞凋亡可能与NOS活力和NO含量升高有关,7-NI可降低细胞凋亡指数.