期刊简介
本刊由卫生部主管，中华预防医学会和天津市卫生防病中心联合主办。于1984年创刊，是环境卫生学专业的学术性期刊（中华预防医学会环境卫生分会唯一认定期刊）。杂志编辑委员会由国内著名的环境卫生学及相关学科的专家、教授组成。本刊报道宗旨是：以预防医学与环境科学相结合，紧密围绕党和国家的卫生工作方针，全方位促进全国各地环境卫生工作水平的提高。主要读者对象：环境卫生、环境医学、环境保护专业工作者，各大专院校卫生学和环境科学的师生等。主要栏目：述评、专题报告、论著、调查研究、技术与方法、监督监测、专业信息、工作交流、卫生标准、综述、讲座等
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首页>环境与健康杂志
- 杂志名称：环境与健康杂志
- 主管单位：中华人民共和国卫生部
- 主办单位：中华预防医学会,天津市疾病预防控制中心
- 国际刊号：1001-5914
- 国内刊号：12-1095/R
- 出版周期：
期刊荣誉：中华预防医学会系列杂志优秀期刊期刊收录：
小鼠无纤毛柱状上皮细胞分泌蛋白基因真核表达载体的构建及其生物活性的鉴定
庞敏；袁丽荣；张振霞；李冬艳；王海龙
关键词：无纤毛柱状上皮细胞分泌蛋白, 真核表达, 脂多糖, 磷脂酶A2
摘要：目的 克隆小鼠无纤毛柱状上皮细胞分泌蛋白(CCSP)基因并构建其真核表达重组体,鉴定重组CCSP的生物学活性.方法 采用TRIzol法提取小鼠肺组织总RNA,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对CCSP基因进行扩增,BamH I和Xho Ⅰ双酶切扩增产物与真核表达载体pCDNA3.1(+),酶切产物连接并转化入感受态细胞Trans 5α,阳性重组质粒pCDNA3.1 (+)-mCCSP经PCR、酶切和测序鉴定正确后,通过DNAfectin 2100 DNA转染试剂将重组质粒转染人胚肾(HEK293T)细胞,采用Western blot法检测表达产物.脂多糖分别刺激转染有pCDNA3.1(+)-mCCSP和pCDNA3.1(+)质粒DNA的HEK 293T细胞,利用磷脂酶A2的水解作用,以掺入大肠杆菌膜的[3H]标记的油酸为酶解底物,检测HEK 293T细胞内PLA2的活力.结果 聚合酶链反应结果显示,从小鼠肺组织中扩增出约290 bp的片段.菌落PCR、双酶切及测序结果显示,重组质粒pCDNA3.1 (+)-mCCSP构建成功且序列正确.Western blot结果显示,在转染pCDNA3.1(+)-mCCSP的HEK293T细胞中有CCSP蛋白的表达,蛋白质分子量约为10 kDa,而转染空质粒组未见表达.CCSP蛋白可以显著降低脂多糖诱导的HEK 293T细胞内PLA2的活力.结论 成功构建了真核表达重组体pCDNA3.1 (+)-mCCSP,且重组蛋白CCSP具有生物学活性,为进一步研究其功能奠定了基础.
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